水產(chǎn)品在我國(guó)動(dòng)物產(chǎn)品消費(fèi)中始終占據(jù)重要地位，且消費(fèi)份額較大——全國(guó)人均水產(chǎn)品消費(fèi)約占豬牛羊肉消費(fèi)量的一半。隨著國(guó)民生活水平的提升，人們對(duì)水產(chǎn)品的需求量也在逐年增加，這促使水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)快速發(fā)展，但同時(shí)也引發(fā)了不少食品質(zhì)量安全問(wèn)題。目前，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)主要以鮮活水產(chǎn)品為主，養(yǎng)殖戶(hù)為有效預(yù)防魚(yú)類(lèi)等患病和增加產(chǎn)量，通常會(huì)非法使用禁用藥物，加之操作不規(guī)范，往往導(dǎo)致水產(chǎn)品質(zhì)量不合格，如消費(fèi)者食用了藥物超標(biāo)的水產(chǎn)品，嚴(yán)重的會(huì)危及生命。水產(chǎn)質(zhì)量安全問(wèn)題日益突出，引起了政府和消費(fèi)者的廣泛關(guān)注，建立有效解決水產(chǎn)中禁用藥物的快速檢測(cè)機(jī)制已迫在眉睫。水產(chǎn)品的質(zhì)量安全是全國(guó)人民享有健康生活的重要保障，而水產(chǎn)品中違禁藥物殘留是當(dāng)前危害最嚴(yán)重的因素之一，孔雀石綠就是其中具有代表性的一種違禁藥物。

 

　　2014年9月，深圳特區(qū)布吉海鮮市場(chǎng)開(kāi)展了一次名為“清水行動(dòng)”的水產(chǎn)品專(zhuān)項(xiàng)執(zhí)法監(jiān)督抽查。此次行動(dòng)中，執(zhí)法部門(mén)共抽檢了43家水產(chǎn)品經(jīng)營(yíng)戶(hù)，共抽取樣品121份，其中淡水魚(yú)樣品90份。經(jīng)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)7個(gè)水產(chǎn)品樣品不合格(孔雀石綠超標(biāo)5個(gè)，硝基呋喃代謝物超標(biāo)2個(gè));2016年底，被國(guó)內(nèi)媒體“熱搜”的北京超市“活魚(yú)下架事件”引起大眾關(guān)注,社會(huì)普遍認(rèn)為其與孔雀石綠的濫用有關(guān);2019年4月，山東省農(nóng)業(yè)農(nóng)村廳委托山東省水產(chǎn)品質(zhì)量檢驗(yàn)中心對(duì)臨朐縣水產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)量安全抽檢，被抽檢的6個(gè)鱘魚(yú)樣品檢驗(yàn)呈陽(yáng)性，結(jié)果為孔雀石綠含量超標(biāo);同年6月，杭州市消保委對(duì)市屬7家買(mǎi)菜類(lèi)APP進(jìn)行消費(fèi)評(píng)測(cè)，結(jié)果為杭州美團(tuán)、叮咚買(mǎi)菜的鱖魚(yú)，天津永輝超市的草魚(yú)均被檢出孔雀石綠超標(biāo)。由此可見(jiàn)，孔雀石綠殘留問(wèn)題已成為一項(xiàng)日益突出的食品安全問(wèn)題。

 

1 什么是孔雀石綠?

 

　　孔雀石綠作為染色劑常被用于皮革業(yè)、紡織業(yè)、制陶業(yè)、食品和生物等領(lǐng)域，是人工合成的三苯甲烷類(lèi)化學(xué)物。同時(shí)，孔雀石綠也可以作為殺菌劑、驅(qū)蟲(chóng)劑，用于預(yù)防與治療水生動(dòng)物的細(xì)菌、真菌和寄生蟲(chóng)感染，由于其成本低廉且效果顯著，因此被普遍用于水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。然而隨著研究的深入，孔雀石綠高毒性、高殘留的性質(zhì)及潛在的致畸、致癌、致突變等毒副作用備受研究人員和消費(fèi)者關(guān)注。鑒于孔雀石綠潛在的致癌性，美國(guó)、加拿大、日本、歐盟等國(guó)家將其列為水產(chǎn)養(yǎng)殖禁用藥物。歐盟法案2002/675/EC規(guī)定，動(dòng)物源性食品中MG(孔雀石綠)和LMG(無(wú)色孔雀石綠)殘留限量為2μg/kg;日本肯定列表明確規(guī)定，在進(jìn)口水產(chǎn)品中不得檢出MG殘留。我國(guó)于2002年5月將孔雀石綠列入《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其他化合物清單》，并于2005年制定了孔雀石綠的使用標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定水產(chǎn)品中的MG和LMG的殘留總限量不得超過(guò)1μg/kg。盡管如此，違規(guī)使用孔雀石綠的事件仍然時(shí)有發(fā)生——歐盟、日本、中國(guó)香港等國(guó)家和地區(qū)均曾從由我國(guó)大陸進(jìn)口的鰻魚(yú)中檢測(cè)出MG和LMG殘留，這不僅影響生態(tài)環(huán)境，還會(huì)成為制約我國(guó)大陸地區(qū)食品質(zhì)量安全和國(guó)際市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力的重要因素。

 

2 檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用

 

　　孔雀石綠進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)后會(huì)快速代謝為無(wú)色孔雀石綠，而無(wú)色孔雀石綠為脂溶性物質(zhì)，相較孔雀石綠而言毒性更強(qiáng)，且基本無(wú)法代謝。國(guó)內(nèi)外均以孔雀石綠及其代謝物無(wú)色孔雀石綠的總量為測(cè)定指標(biāo)，目前測(cè)定方法主要有儀器分析測(cè)定法(高效液相法、液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法等)、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)(酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)、膠體金檢測(cè)技術(shù)等)，以及微光探測(cè)與免疫學(xué)技術(shù)的結(jié)合方法(熒光定量檢測(cè)技術(shù))等。對(duì)于快速篩查市場(chǎng)而言，后兩種方法已逐漸成為檢測(cè)應(yīng)用的主流手段。

 

2.1 儀器分析法

 

　　儀器分析法主要是指利用氣相色譜法、氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法、液相色譜法、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法或各類(lèi)光譜儀等大型精密儀器來(lái)進(jìn)行藥物殘留的分析方法。這是一種準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性好、選擇性強(qiáng)的檢測(cè)方法，現(xiàn)普遍用于檢測(cè)獸藥和農(nóng)藥殘留，許多國(guó)家和地區(qū)已將高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法作為檢測(cè)水產(chǎn)品中孔雀石綠殘留的確證方法。但是，此方法不僅需要使用昂貴的檢測(cè)儀器，還需專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員進(jìn)行操作，無(wú)法實(shí)現(xiàn)大批量快速檢測(cè)。同時(shí)，該方法成本相對(duì)較高，且不具備現(xiàn)場(chǎng)快速篩查的相關(guān)條件。

 

2.2 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)

 

　　免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理，相較于儀器分析法而言，其的優(yōu)勢(shì)為操作便捷，有利于實(shí)現(xiàn)市場(chǎng)的快速篩查?，F(xiàn)階段，用于食品安全的免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)和膠體金檢測(cè)技術(shù)。

 

2.2.1 酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)

 

　　該技術(shù)的原理是應(yīng)用抗原和抗體的特異結(jié)合與酶催化作用的有機(jī)結(jié)合，利用酶促反應(yīng)原理放大了免疫檢測(cè)的效果，在具有較高靈敏度的同時(shí)還具備了定量檢測(cè)的特性。這一檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)靈敏度高、特異性好、高通量和高精密度，且無(wú)需大型儀器設(shè)備就可進(jìn)行大批量的樣品初篩檢測(cè)。該法雖然較儀器法具有一定優(yōu)勢(shì)，但由于其檢測(cè)時(shí)需專(zhuān)業(yè)人員操作，且檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，亦無(wú)法滿(mǎn)足現(xiàn)場(chǎng)快速篩查的需求。

 

2.2.2 膠體金檢測(cè)技術(shù)

 

　　膠體金檢測(cè)技術(shù)是以納米金顆粒作為示蹤標(biāo)識(shí)物，利用抗原和抗體具有特異性結(jié)合的原理所建立的新型免疫標(biāo)記技術(shù)，是色譜層析技術(shù)和納米金技術(shù)的有機(jī)結(jié)合。該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)時(shí)間短且無(wú)需專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員操作，因此膠體金技術(shù)被廣泛應(yīng)用于大分子類(lèi)蛋白、農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、小分子類(lèi)藥物和毒素類(lèi)等的快速檢測(cè)中。雖然膠體金法具有一定的優(yōu)勢(shì)，但由于其靈敏度較差，有漏檢風(fēng)險(xiǎn)，仍無(wú)法滿(mǎn)足國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的要求。

 

2.3 微光探測(cè)與免疫學(xué)技術(shù)的結(jié)合

 

　　隨著各類(lèi)學(xué)科的交叉發(fā)展，現(xiàn)代化快速檢測(cè)技術(shù)越來(lái)越趨向于便攜快速、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果即時(shí)準(zhǔn)確的方向發(fā)展，這也使開(kāi)發(fā)出的相應(yīng)產(chǎn)品具有極大的市場(chǎng)潛力，而熒光定量檢測(cè)技術(shù)就是食品安全快速檢測(cè)市場(chǎng)中代表性的新型檢測(cè)方法之一。此方法是對(duì)免疫學(xué)技術(shù)、色譜層析技術(shù)、生物探針技術(shù)和微光探測(cè)技術(shù)的有機(jī)結(jié)合，且兼具儀器分析法、酶聯(lián)免疫檢測(cè)技術(shù)、膠體金檢測(cè)技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，取長(zhǎng)補(bǔ)短，在保持儀器分析法高精確性的同時(shí)還保留了膠體金法檢測(cè)的快速、簡(jiǎn)便和酶免技術(shù)的高靈敏度、可定量的特點(diǎn)。

 

圖1 孔雀石綠快速檢測(cè)試劑盒

 

3 孔雀石綠檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展

 

　　孔雀石綠的殘留主要體現(xiàn)在水產(chǎn)品中，且在高油酯魚(yú)類(lèi)中尤為明顯，所以針對(duì)孔雀石綠的檢測(cè)對(duì)象主要為可食用組織，根據(jù)該情況我國(guó)也建立了孔雀石綠在可食用性組織中的國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，但由于其需要昂貴的儀器和復(fù)雜的樣本處理過(guò)程，故難以在現(xiàn)場(chǎng)快速篩查場(chǎng)景和基層執(zhí)法部門(mén)中大量推廣。在快速檢測(cè)產(chǎn)品中，孔雀石綠酶免試劑盒最早進(jìn)入快速篩查市場(chǎng)，但由于其繁瑣的操作過(guò)程，很快被膠體金產(chǎn)品所取代。孔雀石綠膠體金產(chǎn)品雖然檢測(cè)速度快(只需30~45分鐘)，但其靈敏度較差，增加了漏檢風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，組織類(lèi)樣本的前處理過(guò)程依然復(fù)雜費(fèi)時(shí)(需要離心、吹干等步驟)，不僅增加了人力成本，也會(huì)在吹干大量溶劑時(shí)污染環(huán)境。針對(duì)以上問(wèn)題，食品檢測(cè)市場(chǎng)一直在尋求解決方法，近年來(lái)推出的SPE產(chǎn)品就是對(duì)吹干步驟的優(yōu)化處理。SPE方法雖然省略了吹干環(huán)節(jié)，使處理速度有了一定的提升，但同樣存在著一些不足：首先，步驟和儀器未得到省略，仍需使用離心及相應(yīng)的儀器，吹干步驟換成了過(guò)SPE柱，同時(shí)也增加了固相萃取儀;其次，SPE柱成本較高，約增加20%~40%的成本;第三，吸附和洗脫時(shí)均需大量試劑，這就在無(wú)形之中浪費(fèi)了溶劑;第四，洗脫效率不穩(wěn)定。

 

　　針對(duì)當(dāng)前快速檢測(cè)方法存在的問(wèn)題，廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“食安科技”)經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的技術(shù)攻關(guān)，結(jié)合高分子納米材料和免疫層析卡的優(yōu)點(diǎn)，開(kāi)發(fā)了全新的孔雀石綠殘留快速檢測(cè)卡，并結(jié)合先進(jìn)的專(zhuān)利數(shù)據(jù)采集技術(shù)，研制出了創(chuàng)新的孔雀石綠FST快速前處理方案(包含膠體金和熒光層析系列產(chǎn)品)，較傳統(tǒng)檢測(cè)產(chǎn)品而言，其檢測(cè)效率提高2倍以上，靈敏度更優(yōu)，精密性更好，智能化更高。

 

4 FST快速前處理方案

 

　　FST的技術(shù)理念基于組織類(lèi)樣本快速便捷的前處理方案，是食安科技專(zhuān)門(mén)為解決繁瑣的組織類(lèi)樣本前處理問(wèn)題而開(kāi)發(fā)的國(guó)內(nèi)外首創(chuàng)方案，可謂組織類(lèi)樣本POCT技術(shù)的一大突破。其省略了離心、吹干或上萃取柱步驟，實(shí)驗(yàn)全程只需一把移液器即可完成操作，大大縮短了樣本檢測(cè)時(shí)間，降低了檢測(cè)難度。

 

　　目前，食安科技的FST系列產(chǎn)品包括兩大類(lèi)——FST-膠體金類(lèi)和FST-熒光層析類(lèi)?？兹甘GFST-膠體金產(chǎn)品在保持同類(lèi)市場(chǎng)高靈敏度檢測(cè)的前提下，把組織類(lèi)的樣本處理進(jìn)行了極簡(jiǎn)化處理，處理時(shí)間從常規(guī)的25~40分鐘縮短為10分鐘以?xún)?nèi)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程無(wú)需任何輔助儀器，節(jié)省了人力及物力成本，并順利通過(guò)了2018年的農(nóng)業(yè)部驗(yàn)證和2019年的廣東省快檢驗(yàn)證。

 

 

　　雖然孔雀石綠FST-膠體金產(chǎn)品在性能上有了較大提升，但其不能定量的缺點(diǎn)始終無(wú)法解決。針對(duì)這一難點(diǎn)，食安科技開(kāi)發(fā)了FST-熒光層析系列產(chǎn)品，其結(jié)合高分子納米技術(shù)和微光探測(cè)技術(shù)，實(shí)為FST-膠體金產(chǎn)品性能的進(jìn)一步提升，具有靈敏度高(可達(dá)液相質(zhì)譜的靈敏度要求)、樣本處理快速(縮短為5分鐘以?xún)?nèi))、抗干擾能力更強(qiáng)(較大稀釋比例降低了樣本對(duì)產(chǎn)品的干擾)、半定量的檢測(cè)(檢測(cè)結(jié)果以數(shù)據(jù)顯示)、數(shù)據(jù)即時(shí)處理(數(shù)據(jù)即時(shí)存儲(chǔ)或打印)等優(yōu)勢(shì)。孔雀石綠FST-熒光層析產(chǎn)品順利通過(guò)了2018年農(nóng)業(yè)部驗(yàn)證，成為全場(chǎng)檢測(cè)時(shí)間最短、靈敏度的快速檢測(cè)產(chǎn)品之一。為了更好的區(qū)分現(xiàn)有市場(chǎng)中主流檢測(cè)產(chǎn)品間的差異，本文針對(duì)參加2018年農(nóng)業(yè)部驗(yàn)證的相關(guān)技術(shù)產(chǎn)品做了簡(jiǎn)單的比較，如表1。

 

5 結(jié)論與展望

 

　　水產(chǎn)品是國(guó)民餐桌食物的重要組成部分，我國(guó)政府也一直致力于解決食品安全問(wèn)題，近年來(lái)更是針對(duì)水產(chǎn)品藥物殘留加大了抽檢力度?？兹甘G一直是人們關(guān)注的重點(diǎn)，但由于現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的樣本前處理過(guò)程較為繁瑣，抽檢率無(wú)法大幅提升。因此，隨著政府的管控進(jìn)一步加強(qiáng)，快速篩查市場(chǎng)對(duì)現(xiàn)有的檢測(cè)技術(shù)也必將提出更高要求。快速、便捷、準(zhǔn)確、智能化等一直是快速檢測(cè)的重要需求，而食安科技的FST前處理技術(shù)恰巧是對(duì)這一需求的良好補(bǔ)充。隨著FST技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展，相信其將對(duì)孔雀石綠濫用情況的監(jiān)管工作產(chǎn)生積極影響。